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标题:【讨论】液相色谱测小分子量肽的柱子选择
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我准备用高效液相色谱测酶水解蛋白的肽的分子量(小于1万道尔顿),应该用凝胶柱吧,不知哪种型号的好些呢?
洗脱液用什么呢?可以用蒸馏水么?
另外如果是液相的半制备,制备量大概是多少呢?
127.0.0.1 2008-01-02 18:59
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2

具体是用凝胶柱还是用反相柱,要看你的目的是什么。
如果只是想把酶水解的产物有所分离,什么都可以。
如果想把每一个产物得到具体的分离(甚至鉴定序列,那要用反相)。
如果只是想看看酶水解的程度,可以用凝胶,这个相对简单,好分析。

洗脱液用什么,要看具体的蛋白/多肽,因为各种蛋白多肽的极性、溶解性不一样。
至于蒸馏水,一般不用,无论是凝胶柱,还是反相柱,都尽量避免用纯水来洗脱。

59.173.64.16 2008-01-02 19:00
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3
我准备用凝胶柱测水解物的分子量范围,然后根据不同的范围收集肽,然后再在以后的分析中用。那时候可能要分纯,测序等等。
59.173.64.16 2008-01-02 19:00
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4

半制备和制备的量一般没有明确的数,少量的制备一般就被称为半制备,如果制备的量比较大(具体有多大,可以是g级,也可以是mg级,甚至是Kg级才被成为制备,而非半制备),就称为制备。
有一个是肯定,无论是半制备液相,还是制备液相,其液相色谱分离后的产物是我们想要得到的产物。

如果想用酶水解蛋白,然后再用液相分离水解产物,最后用MS等手段解析水解产物,那这时的制备量可以到ng级就够用了,也就是酶水解蛋白时,蛋白的量有10到20微克就可以了。

59.173.64.16 2008-01-02 19:01
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5
一般来说肽段用的是乙腈,水,磷酸或磷酸盐类的缓冲溶剂这些东西的混合体系。很多情况下PH值可能到2左右。所以柱子的选择还要考虑这些因素。我用C18柱做过,不过分子量只是一两千左右,没有到八九千。这个分子量范围反相柱不知道容不容易堵,柱压怎么样。你再看看文献。
59.173.64.16 2008-01-02 19:02